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载体 启动子 筛选 融合标签 蛋白酶切 特性与应用 N端 C端 pET-3a-d T7 Amp T7 无 无 pET基本型，可通过选择合适的载体，保证插入片段阅读框正确 pET-5a-c T7 Amp T7 无 无 pET-9a-d T7 Kan T7 无 无 pET-11a-d T7lac Amp T7 无 无 pET-17b T7 Amp T7 无 无 pET-17xb T7 Amp T7(260aa) 无 无 pET-12a-c T7 Amp ompT 无 SP 融合表达的信号肽协助目的蛋白转运到细胞周质，促进蛋白正确折叠；转运时信号肽被信号肽酶（SP）切除 pET-20b(+) T7 Amp pelB His SP pET-22b(+) T7lac Amp pelB His SP pET-25b(+) T7lac Amp pelB HSV/His SP pET-26b(+) T7lac Kan pelB His SP pET-27b(+) T7lac Kan pelB HSV/His SP pET-14b T7 Amp His 无 Tb 带有可切除的N端His融合标签的基本载体类型 pET-15b T7lac Amp His 无 Tb pET-16b T7lac Amp His 无 Xa pET-19b T7lac Amp His 无 Ek pET-21a-d(+) T7lac Amp T7 His 无 N端带有T7融合标签表位，N端或C端带有His融合标签 pET-23a-d(+) T7 Amp T7 His 无 pET-24a-d(+) T7lac Kan T7 His 无 pET-28a-c(+) T7lac Kan His/T7 His Tb pET-29a-c(+) T7lac Kan S His Tb 带有可切除的N端S/His融合标签，C端带His标签。可选择不依赖连接反应克隆（LIC）方式 pET-30a-c(+) T7lac Kan His/S His Tb/Ek pET-30EK/LIC T7lac Kan His/S His Tb/Ek pET-30Xa/LIC T7lac Kan His/S His Tb/Xa pET-31b(+) T7lac Amp KSI His 无 促进形成包涵体，适合表达小肽 pET-32a-c(+) T7lac Amp Trx/His/S His Tb/Ek 带有可切除的N端Trx标签，促进形成可溶蛋白，C端带His标签。可选择不依赖连接反应克隆（LIC）方式。 pET-32EK/LIC T7lac Amp Trx /His/S His Tb/Ek pET-32Xa/LIC T7lac Amp Trx /His/S His Tb/Xa pET-33b(+) T7lac Kan His/PKA/T7 His Tb PKA位点用于32P标记 pET-39b(+) T7lac Kan DsbA/His/S His Sp/Tb/Ek 带有可切除的Dsb标签，协助蛋白转运到细胞周质，促进蛋白正确折叠 pET-40b(+) T7lac Kan DsbC/His/S His Sp/Tb/Ek pET-41b(+) T7lac Kan GST/His/S His Tb/Ek GST标签用于纯化和鉴定蛋白；带有可切除的N端标签，C端带His标签。 pET-42b(+) T7lac Kan GST/His/S His Tb/Xa pET-43.1a-c(+) T7lac Kan Nus/His/S HSV/His Tb/Ek 带有可切除的Nus标签，显著提高蛋白可溶性 pET-44a-c(+) T7lac Kan Nus/His/S     pET-45a-c(+) T7lac Kan His S Ek 带有可切除的His标签，C端S标签；可选择不依赖连接反应克隆（LIC）方式。提供不同复制子形式载体用于共表达 pET-46EK/LIC T7 Amp His S Ek pET-47b(+) T7lac Kan His S HRV3C 利用HRV3C蛋白酶在亲和纯化过程中在柱去除融合标签，低温操作，方便快捷，保留更多的蛋白活性 pET-48b(+) T7lac Kan Trx/His S HRV3C pET-49b(+) T7lac Kan GST/His S HRV3C pET-50b(+) T7lac Kan His/Nus/His S HRV3C/Tb pET-51b(+) T7lac Amp Strep.Tag II His Ek 利用融合标签Strep.Tag II与其相应亲和树脂有高度特异性结合，一步纯化得到纯度高于95％的目的蛋白。 pET-51 Ek/LIC T7lac Amp Strep.Tag II His Ek pET-52b(+) T7lac Amp Strep.Tag II His HRV3C/Tb pET-52 3C/LIC T7lac Amp Strep.Tag II His HRV3C/Tb Duet共表达系列         研究大肠杆菌中的共表达有助于获得更多蛋白复合物的知识。实践证明共表达优点很多，包括增加目的蛋白的产量、可溶性、活性并减少降解等。 Novagen的Duet系列新载体也是T7启动子表达，载体间彼此间复制子兼容、抗性不同，可以在一个宿主菌中，根据需要表达多达8个蛋白。选择Duet载体和普通pET或pETcoco™载体组合，也可以进行共表达。详细情况请参阅Novagen 2004-05目录206-209页 Radiance™克隆法         这种PCR克隆方法提供各种大肠杆菌、昆虫和哺乳动物细胞表达载体，共同具有以下优点，使表达变得更加便捷： LIC（非连接反应克隆）法确保定向、高效克隆 目的基因可以在Radiance系列任何载体间实现方便的亚克隆，便于多系统表达 载体均为Ek/LIC式，可以通过肠激酶处理去除所有载体来源的氨基酸序列，实现纯化后获得全天然序列蛋白 可以完成多个蛋白同时表达 详细情况请参阅Novagen 2004-05目录58-58页 VariFlex™大肠杆菌表达系统         VariFlex™大肠杆菌表达载体同时带有新克隆的增加可溶性的SET（solubility enhancement tag）标签，用于可溶蛋白定量的Q（quantitation）标签以及SBP（streptavidin binding peptide tag）链亲和素结合多肽标签，使真核蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化又有了新的选择。 单一载体同时提供增加可溶、定量检测和温和纯化所需的三类标签 提供完备的载体选择和配套表达菌株 昆虫细胞表达         Novagen提供3种昆虫细胞表达的分方案：高水平瞬时表达，持续稳定表达以及裂解性杆状病毒系统。 瞬时表达         这一表达策略的关键是保证很高的转染效率。通常转染后24－48小时表达达到高峰。结合Novagen的Insect GeneJuice专用转染试剂，InsectDirect质粒载体能实现高水平瞬时表达。 不需要构建重组杆状病毒，而且由于载体的双启动子设计，蛋白的表达和检测可以在昆虫细胞和大肠杆菌中进行。 昆虫GeneJuice转染试剂专用于Sf9细胞的高效转染，毒性极低。配套Ni-NTA纯化试剂盒用于纯化His融合蛋白。 48小时实现表达，而非通常的2－3周。 特别适合用于高通量多目标蛋白表达分析。 表达产量高，1 ml培养基目的蛋白可达22 μg。 载体种类多，可以根据需要选择带N-端、C-端融合标签的表达，带分泌信号的表达，或不带标签的天然蛋白表达。 InsectDirect与传统杆状病毒方法的比较   InsectDirect 系统   细菌转位法   传统杆状病毒法 第1天 以昆虫GeneJuice转染试剂转染pIEx重组质粒进入Sf9细胞 第1天 以细菌来源的AcNPV重组子转染昆虫细胞 第1天 以重组转移质粒和线性AcNPV载体DNA共转染昆虫细胞 第3天 纯化目的产物 第4天 收获重组杆状病毒；表达检测；扩增制备高滴度病毒 第4天 选择噬斑并重新铺板     第7天 测病毒滴度 第8天 挑选噬斑并扩增     第11-13天 转染昆虫细胞并表达蛋白 第11天 表达筛查；扩增     第14-16天 收获细胞并纯化蛋白 第14天 测病毒滴度         第18天 转染昆虫细胞并表达蛋白         第20-21天 收获细胞并纯化蛋白 持续稳定表达         在糖蛋白、分泌蛋白以及受体膜蛋白的表达研究中，采用稳定转染细胞进行持续表达比较有利。结合pTK-neo载体（带有新霉素等抗性标记的质粒）共转染昆虫细胞，。InsectDirect质粒型表达可以建立多种稳定表达细胞系。多数抗性细胞会以不同水平持续表达目的蛋白。这些细胞系能传代并保持表达（可达50代以上），特别适合积累并对目的蛋白作长期研究。 BacVector杆状病毒表达系统         Novagen的 BacVector系统包括线性杆状病毒DNA，昆虫细胞以及转染试剂，适合最高效、持续的昆虫细胞表达的需要。